纳米抗体造备

新利luck18生物提供驼科动物VHH抗

纳米抗体服务简介

• 纳米抗体(Nanobody)在多个方面均优于传统抗体
  ；谕湛贫镏亓纯固宓腣HH单域抗体的特殊结构，兼具了传统抗体与幼分子药物的优势，能够有效克服传统抗体开发周期长、不变性较低、保留前提刻薄等缺点，逐步成为新一代医治性生物医药与临床诊断试剂中的新兴力量。
  相迸宗通例抗体，纳米抗体的优势蕴含：
  分子量幼，可穿透血脑樊篱
  ；能够在原核或真核系统中高表白
  ；特异性强、亲和力高
  ；对人的免疫原性弱等。

M13 噬菌体展示技术

• 噬菌体展示技术（phage display）是将表源编码多肽或蛋白质的基因通过基因工程技术插入到噬菌体表壳蛋白结构基因的适当地位，在阅读框能正确表白，使表源多肽或蛋白在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，随子代噬菌体的重新组装呈此刻噬菌体表表，能够维持相对的空间结构和生物活性。
  而后，利用靶分子，选取相宜的淘洗步骤，洗去未特异性结合的噬菌体。接着，用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体习染大肠杆菌扩增。经过多轮的富集，逐步提高能够特异性鉴别靶分子的噬菌体比例，最终获得鉴别靶分子的多肽或者蛋白。

噬菌体文库的构建与纳米抗体的淘选

• 新利luck18生物能够提供未经免疫的、足龄（24-36月龄）的骆驼进行抗原免疫。依照尺度免疫步骤，每个项目免疫4-6针。免疫期间，我们为客户提供ELISA效价测定服务，保障抗血清ELISA效价合格后采血分离PBMC。
  新利luck18生物选取M13噬菌体的pIII蛋白进行VHH抗体(纳米抗体)表表展示。新利luck18科学家构建了带有HA和6*His tag双标签的噬菌粒载体，同时造备出了拥有10⁸转染效能的TG1宿主菌感触态，经过2-3次转染与扩增，可能为客户提供有效库容量大于10⁸的高质量VHH抗体展示文库。经过几轮纳米抗体文库淘筛，即可获得至少20株拥有高亲和力的噬菌体株。

骆驼与羊驼VHH抗体文库对比

• 比力项目	骆驼VHH抗体文库	羊驼VHH抗体文库
  抗原耐受量	高，可多种抗原混合高剂量免疫	较高，多种抗原混合中等免疫剂量
  HCAb血清中球蛋白比列	60%~80%	20%~30%
  中和抗体效价	高	较高
  采血量	一次可采血200ml	一次80-100ml血液
  有效库容	高，免疫库108-109	高，免疫库107-108
  动物成本	较低	高
  抗原需要量	4-6mg，纯度>85%	4-5mg，纯度>85%

纳米抗体造备服务流程示意图

• 

  Image source: MA Lin-lin, et al. Construction and screening of phage display library for TIM-3 nanobody. Acta Pharmaceutica Sinica2018, 53 (3): 388-395.

驼科纳米抗体文库造备项目流程

• 步骤	内容	周期	交付
  第一步：抗原筹备	客户提供抗原或者新利luck18筹备抗原	3-4周	若是客户提供抗原，质量尺度：1. >5mg ；2. SDS-PAGE >95%
  第二步：动物免疫	免疫未免疫的空缺骆驼 5 ml 未免疫血清 ELISA检验血清效价	10-12周	若是由于抗原毒性导致的动物殒命,必要收取肯定用度 凭据 ELISA了局，客户决定若何建库
  第三步：抗体cDNA造备	表周血分离PBMC 提取总RNA并回转录为cDNA	3-4周	提供存放在Trizol 中的PBMC 提供高保真RT-PCR造备的cDNA
  第四步：噬菌体文库构建	构建噬菌粒 噬菌体文库构建		VHH片段插入率≥75% 有效库容量≥108CFU/mL
  第五步：噬菌体文库淘选	噬菌体展示纳米抗体、淘选、至少淘选两轮 阳性克隆的ELISA验证、鉴定、筛选和测序（200个克隆测序） 阳性克隆测序及测序了局分析	4-6周	保障至少 20 个序列

有关文章