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Caco-2 细胞渗入性试验

Caco-2细胞是一种人类结肠癌细胞系

2023-08-08
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arrow.png Caco-2渗入性测试(Caco-2 Permeability Assay)是一种常用的体表尝试步骤,用于评估化合物在人体肠路中的吸收水平和渗入性。

Caco-2细胞是一种人类结肠癌细胞系,常用于仿照人体幼肠上皮细胞层的个性和职能。这个细胞系初次从1977年一名患有结肠腺癌的男性的肿瘤中分离出来,被定名为Caco-2。

Caco-2细胞(起源--ATCC).jpg

Caco-2细胞(起源: ATCC)

Caco-2渗入性测试(Caco-2 Permeability Assay)是一种常用的体表尝试步骤,用于评估化合物在人体肠路中的吸收水平和渗入性。当药物通过口服蹊径赐与时,药物的吸收水平和渗入性是重要的药代动力学参数。

基于人类结肠癌细胞株Caco-2的个性,能够通过仿照幼肠上皮细胞层的情况,来预测化合物的口服生物利用度。在Caco-2细胞造就在渗入聚碳酸酯膜上时,可能形成一个单层上皮细胞,能够用于仿照人肠上皮细胞的的状态,形成顶膜侧(apical,AP)和基底表侧(basolateral,BL)结构,能在顶膜表表分化出刷状缘绒毛。与PAMPA(平行人为膜渗入试验)相比,Caco-2细胞拥有通量较低,成本较高的特点,而后Caco-2细胞能够同时急剧筛选大批量药物,所必要的药量较少,相比动物模型而言,是相对经济省时的选择。并且,coca-2能够表白肠路转运体和酶,有可能预测自动转运和有多种转运体的药物相互作用。

推荐阅读:    什么是Caco-2细胞模型 ?

以下为Caco-2细胞渗入性试验的通常步骤:

(1) 首先前处置必要将Caco-2细胞造就在多孔通明的造就膜上,形成一个细胞单层,通常必要14-28天。在造就过程中,确保Caco-2细胞达到肯定的分化水平,以更好地仿照肠上皮细胞层。

(2) 将待测的化合物参与到HBSS中,让其与Caco-2细胞接触。

(3) 让细胞在孵育箱中以恒定的温度、湿度和CO2浓度下造就一段功夫,通常为2幼时。

(4) 在孵育实现后,别离网络上层液(在细胞上方)和基层液(通过细胞层进入孔隙膜下方)。

使用相宜的技术,例如高效液相色谱法(HPLC)或液相质谱联用法(LC-MS),丈量样品中化合物的浓度。

(5) 通过比力上层液和基层液中化合物的浓度,推算化合物的透过率、吸收速度以及其他有关参数。药物在 Caco-2细胞单层模型中的表观渗入系数(apparent permeability coefficient ,Papp )的推算 :Papp=dCr/dt×Vr×1/A ×1/C0 。 Papp单元为 cm/s 。

Caco-2细胞渗入性试验能够提供有关化合物在仿照肠路前提下的吸收个性的重要信息。通过丈量化合物通过细胞层的能力,评估其被吸收到循环系统中的潜力,并预测其在体内的药代动力学行为。这对于药物研发和口服药物的生物利用度评估极度关键。但是依然必要把稳,Caco-2细胞渗入性试验是一种体表步骤,固然可能提供有效的参考数据,但在现实利用中仍必要结合其他成分综合评估化合物的吸收机能和渗入性。

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从细胞造就到数据分析,手把手拆解Caco-2尝试全流程

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参考文件:

1. Xiu-wei Yang, Xiao-da Yang, Ying Wang, Lian Ma, Yue Zhang, Xiao-gai Yang, Kui Wang. Establishment of Caco-2 cell monolayer model and standard operation procedure for assessing intestinal absorption of chemical components of traditional Chinese medicine. Journal of Chinese Integrative Medicine, 2007, 5(6): 634-641.

2. 王莎, 刘斯琪, 丁鹏敏, 庞月笙, 陶志, & 王如峰. (2020). 体表模型在中药代谢钻研中的利用. PROGRESS IN PHARMACEUTICAL SCIENCES, 44(2), 119-132.

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